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Le sang est constitué de cellules et de plasma (ou sérum), un liquide qui est normalement de couleur jaune paille et transparent. Les appareils qui analysent les spécimens de sérum (tests de biochimie) surveillent trois aspects du sérum: la lipémie, l'indice d'ictère et l'indice d'hémolyse. L'indice d'hémolyse est une mesure de la couleur rouge du sérum. Cette couleur est normalement due quasi exclusivement à la présence d'hémoglobine provenant de la rupture de la membrane des globules rouges. L'indice d'hémolyse est exprimé en nombre de « plus » (de zéro à ++++). Un indice d'hémolyse de zéro est normal. Un résultat non négatif (+ à ++++) indique une concentration anormale d'hémoglobine qui peut être due à des causes pathologiques (maladies hémolytiques), mais reflète aussi très souvent une anomalie de préparation des spécimens. Qu'est-ce que le sang non hémolysé ?. Chez certains patients, la membrane des globules rouges est plus fragile et un nombre anormalement élevé de globules rouges se brisent au moment du prélèvement (prélèvement traumatique, en particulier par microméthode chez le jeune enfant) ou pendant le processus de stabilisation du spécimen par centrifugation.
La suite de notre étude a donc été réalisée avec ce matériel biologique. Les tubes de sangs que nous recevons viennent des différents laboratoires partenaires d'HORIBA Medical. Les dix sangs ont été centrifugés à 700g pendant 5 minutes. Nous avons procédé par la suite à l'étape de lavage: le surnageant de chacun des 10 tubes de sang a été prélevé et jeté puis remplacé par un volume semblable de PBS. Pour finir, les échantillons ont été homogénéisés puis centrifugés à 700g pendant 5 minutes. Le PBS a été obtenu à partir de tablettes achetées chez Sigma-Aldrich, une tablette a été diluée dans 200ml d'eau osmosée, représentant 0. 01M de tampon phosphate, 0. 0027M de chlorure de potassium et 0. 137M de chlorure de sodium soit pH 7. Principe du test hémolytique - Tests lytiques sur les cellules sanguines. 4 à 25°C. Un second lavage a été réalisé dans les mêmes conditions. Le troisième lavage a été effectué au sérum AB. Suite à ce dernier lavage, les surnageants ont été prélevés, éliminés et remplacés par un volume équivalent de sérum AB. Après mélange des différents tubes, l'hématocrite du pool obtenu a été vérifié grâce à un automate d'hématologie, de type ABX Pentra 60 d'HORIBA Medical.
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Des tests biochimiques ultérieurs peuvent affiner encore plus lidentification. Par exemple, une réaction hémolytique bêta est indicative dun streptocoque. Échantillon de sang hémolyse d. Le test des organismes Streptococcus avec de la bacitracine est souvent la prochaine étape. La bacitracine est un antimicrobien produit par la bactérie Bacillus subtilis. Les souches de Streptococcus pyogenes sont presque uniformément sensibles à la bacitracine. Mais dautres groupes antigéniques de Streptococcus ne sont pas sensibles à la bacitracine. Voir aussi Techniques de laboratoire en microbiologie; Staphylocoques et infections à staphylocoques; Streptocoques et infections streptococciques Navigation de l'article
Hémolyse L'hémolyse est la raison la plus courante de rejet des échantillons par les laboratoires. L'hémolyse est définie comme la rupture des globules rouges avec la libération de l'hémoglobine et des composants intracellulaires dans le plasma. La libération d'hémoglobine fait apparaître le sérum ou le plasma de couleur rouge pâle à rouge cerise. Causes de l'hémolyse: L'hémolyse peut être intravasculaire ou extravasculaire. Hémolyse : définition et explications. L'hémolyse intravasculaire est très rare et résulte généralement d'une réaction à une transfusion sanguine ou d'une anémie hémolytique. L'hémolyse extravasculaire est assez fréquente et se produit lors de techniques de phlébotomie, de manipulation, de transport et de stockage inappropriés des échantillons. Mécanisme des interférences Fuite des constituants des globules rouges dans le plasma ou le sérum. Interférence spectrophotométrique/colorimétrique par l'hémoglobine. Participation de l'hémoglobine à la réaction par augmentation ou inhibition. Dilution des composants du sérum ou du plasma.
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Voir vos résultats de formule sanguine, le cas échéant, pour des anomalies reliées aux syndromes hémolytiques. La présence d'hémolyse indique par ailleurs que des éléments normalement contenus dans le globule rouge se retrouvent dans le sérum. Des taux d'hémolyse de ++ à ++++ vont donc interférer entre autres à la hausse avec la mesure du potassium, du fer, de la LDH et de l'acide folique.
Le principe de cette méthode repose sur la mesure de l'absorbance à 540nm de l'hémoglobine, contenue dans les surnageants, obtenus après centrifugation du milieu dans lequel les globules rouges ont été incubés. Ce milieu contient différentes concentrations en tensioactifs. Ainsi le tracé des valeurs d'absorbances acquises en fonction de la concentration en tensioactifs fournit des courbes d'hémolyse. La Figure 3-3 illustre une courbe sigmoïdale d'hémolyse théorique en fonction de la concentration en tensioactifs. Figure 3-3: Courbe d'hémolyse théorique en fonction de la concentration en tensioactifs. C sat = Concentration de saturation, C sol =Concentration de solubilisation et HE 50 =Concentration pour laquelle 50% des GR sont lysés. Échantillon de sang hémolyse rose. Si on compare cette courbe d'hémolyse au mode d'action théorique, le premier plateau représente l'incorporation du tensioactif dans la membrane jusqu'à la saturation de celle-ci [2]. La pente correspond à la lyse caractérisée par la fuite d'hémoglobine et est suivie d'un second plateau caractéristique de la solubilisation ou de la perméabilisation membranaire, correspondant à la libération totale d'hémoglobine.