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Après avoir récupéré la tartrazine, on change d'éluant pour récupérer le bleu patenté. On utilise ici de l'éthanol. En effet, la tartrazine a peu d'affinité pour la silice par rapport à l'éluant, qu'on utilise l'eau salée ou l'éthanol. C'est pourquoi elle est entraînée facilement. Par contre, le bleu patenté V développe plus d'interaction avec la silice que la tartrazine, et l'eau salée n'est alors pas un éluant capable de l'entraîner, contrairement à l'éthanol. Le bleu patenté est entraîné par la phase mobile, et il est récupéré dans un autre tube. Colonne en verre pour chromatographie pour. Il est souvent utile de réaliser des chromatographies sur couche mince sur chaque tube pour vérifier où sont les composés à séparer, dans le cas où ceux-ci ne sont pas colorés. La technique de la chromatographie sur colonne permet la séparation des différents constituants d'un mélange, mais elle peut être utilisée couplée à un moyen de détection, comme par exemple une spectroscopie UV – visible ou une spectrométrie de masse et on obtient ainsi une chaîne complète automatisable d'analyse.
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Lecture zen La chromatographie d'adsorption est une technique de séparation de composés basée sur la différence d'affinité existant entre ces composés, la phase mobile, qui entraîne les composés, et la phase stationnaire. En effet, selon la plus ou moins grande affinité entre les solutés et la phase stationnaire ou mobile, les constituants du mélange migrent à des vitesses différentes et sont ainsi séparés. Introduction La technique présentée ici est la chromatographie sur colonne, elle utilise une phase stationnaire introduite dans une colonne de verre. Colonnes en verre pour chromatographie - LabMaterials by Blanc-Labo SA. C'est une technique très largement utilisée notamment lors de réaction en chimie organique, pour séparer et purifier les différents constituants d'un mélange. Elle fut découverte en 1906 par le botaniste russe Tswett, qui montra que l'on pouvait séparer des colorants végétaux en faisant passer leur solution dans l'éther de pétrole à travers une colonne remplie de carbonate de calcium. Au cours de cette séquence nous verrons sur l'exemple d'un mélange de colorants, extraits du sirop de menthe, le principe de cette technique en utilisant comme phase stationnaire la silice (SiO 2).
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On s'assure régulièrement de ne pas assécher la phase stationnaire, en vérifiant qu'il reste toujours de l'éluant au niveau du sable. Réalisation de l'expérience On amène le niveau d'éluant au niveau de la surface du sable. On peut alors déposer délicatement la solution de colorants en haut de colonne à la pipette Pasteur afin de ne pas perturber la surface de silice. Colonne en verre pour chromatographie liquide. On ouvre le robinet pour que les colorants arrivent au niveau de la silice. On rajoute quelques millilitres d'éluant et on ouvre de nouveau le robinet afin de s'assurer que toute la solution soit en tête de la colonne de silice. On peut alors ajouter l'éluant. Les premiers millilitres doivent toujours être ajoutés avec précaution à la pipette pasteur afin de ne pas perturber la surface de silice. Ensuite, on peut ajouter l'éluant plus rapidement en le versant directement dans la colonne. L'éluant utilisé ici dans un premier temps est l'eau salée, il permet l'élution de la tartrazine, alors que le bleu patenté V reste fortement retenu par la silice.
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